凍結保存したiPSC凝集体を3D懸濁培養系に直接播種することは推奨しません。
融解したiPS細胞は、mTeSR™ PlusでCorning® Matrigel® hESC-Qualified Matrix（Corning #354277）上で2D培養すると、約2回の継代で安定化します。安定化した細胞は別の馴化段階を経ずに動的懸濁培養（3D培養系）へと直接移行できます。
iPS細胞を正常に増殖させ、懸濁培養系内で多能性を維持するには、高品質なiPS細胞の培養から始めることが非常に重要です。通常、iPSCはmTeSR™ PlusならCorning® Matrigel® hESC-Qualified Matrix上に2Dで維持し、ReLeSR™で解離処理して直径50～200 µmの塊として継代します。
2Dで培養したiPS細胞に対して、以下の示す高品質な細胞の特性をもつことを確認した上で3D懸濁培養系に移行してください。
・フローサイトメトリー評価において、90%以上の細胞でOCT4、TRA-1-60、SSEA-3を含む未分化マーカーを高く発現
・コロニーの形態が良好で、分化した細胞の割合が10%未満
・増殖速度が正常
・Gバンディング解析またはqPCRによる評価において、核型の保持を確認