iPS細胞の融解および播種手順は、購入したiPS細胞株の製品情報シート(PIS)をご参照ください。
以下は、凝集体として凍結保存したiPS細胞の一般的な融解手順です。
1. バイアルの外側を70% エタノールまたはイソプロパノールで拭きます。
2. バイオセーフティキャビネット内でキャップを4分の1回転させて内圧を解放し、再び締め直します。
3. 37℃のウォーターバス内でバイアルを穏やかに振りながら細胞を素早く解凍します。
4. 凍った細胞の小さいペレットが残っている間に、バイアルを引き上げます(細胞はボルテックスをしないでください)。
5. バイアルの外側を70% エタノールまたはイソプロパノールで拭きます。
6. 2 mL血清ピペットでクライオバイアルの中身を15 mLコニカルチューブに移します。
7. 5~7 mLの温かいmTeSR™ Plusを15 mLチューブに滴下して加えながら穏やかに混合します。
8. 細胞を室温(15~25℃)、300 x gで5分間遠心分離します。
9. 細胞ペレットに触れないようにしながら培地を吸引します。
10. 細胞ペレットにmTeSR™ Plusを添加し、チューブを穏やかに弾いて再懸濁します。ピペッティングせずに、細胞を凝集体として維持するように注意してください。
注1:解凍時、細胞は凍結保存した時と同じ培養系で培養してください。
注2:無菌かつ制御した条件下での最適な凍結細胞融解には、ThawStar® CFT2 Automated Thawing Systemの使用がおすすめです。
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ES/iPS細胞の凍結保存と融解