iPS細胞株の市販に必要な承認基準と、評価項目の分析方法を教えてください。

下表をご参照ください。

評価項目 分析方法 承認基準
生存率 NucleoCounter® NC-250™（ChemoMetec社）による、
解凍した細胞の生存率評価		 ≥ 60%
回収 特定の条件で解凍・培養後、細胞を回収 播種後24時間後に回収可能な接着、および細胞がコンフルエンスに成長
細胞株同一性 Powerplex® 16 HS System（Promega社）でSTRを増幅 一致
無菌性 TSBおよびFTB中で14日間培養後、細菌と真菌の有無を確認 陰性
マイコプラズマ EZ-PCR™ Mycoplasma Detection Kit（Sartorius社）で
マイコプラズマの有無を確認		 陰性
ウイルススクリーニング ヒト網羅的CLEAR PCRパネル 陰性
TCR遺伝子再構成 T細胞クロナリティーアッセイ 指定なし
残存ベクター ゲノムDNAのPCR解析 陰性
核型 分裂中期の細胞20個にG-T-L Bandingを実施 正常
20q増幅 蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH） 陰性
コピー数変異 Infinium CytoSNP-850K v1.2 BeadChip
（Illumina社、#20025643）によるゲノムDNA分析		 指定なし
祖先 EthSEQによる全エクソーム配列データ解析 指定なし
遺伝子変異 ClinVarによる全エクソーム配列データ解析 指定なし
TP53とBCORの状態 ClinVarによる全エクソーム配列データ解析 指定なし
未分化マーカー発現 3継代アッセイとフローサイトメトリーによる未分化細胞マーカーの検出 OCT4+, TRA-1-60+ ≥ 80%
3胚葉分化能 STEMdiff™ Trilineage Differentiation Kitで分化させた細胞にフローサイトメトリーを実施 内胚葉：CXCR4+, SOX17+ ≥ 70%
中胚葉：T+, NCAM+ ≥ 70%
外胚葉：PAX6+, NESTIN+ ≥ 70%

略語：
STR = Short Tandem Repeat、TSB = Tryptic Soy Broth、FTB = Thioglycollate Broth、CLEAR = Cell Line Examination and Report、TCR = T cell receptor

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