正確な定量のためには、CFU培養の開始に使用する細胞数と、得られるコロニー数との間に線形関係がなければなりません。
コロニーが多すぎる（オーバープレーティング）と、必須栄養素の枯渇、pHの変化、細胞代謝産物の蓄積により、前駆細胞の増殖が阻害されます。
オーバープレーティングはまた、個々のコロニーの識別が難しいことからカウントエラーを引き起こします。コロニーが少なすぎる（アンダープレーティング）と、統計的に不正確なデータが得られる可能性があります。
細胞の播種濃度は、動物種と細胞ソースに依存します。これはドナーと細胞ロットによって異なる可能性があることから、CFU頻度を線形範囲内かつCFUアッセイの検出限界内に確保するために、一定の濃度範囲内で2〜3個の細胞濃度を取って播種することを推奨いたします。詳細な手順については、以下の技術マニュアル中、Table 6および7をご参照ください。
それでもコロニーが多すぎる（100を超える）場合は、推奨範囲の下限を下回る濃度で播種することも可能です。

MethoCult™を使用したヒトコロニー形成単位（CFU）アッセイ（STEMCELL Technologies社ウェブサイト）