ヒトCFU培養物を14日より長く放置できますか?
ヒトCFU培養物は14日より長く放置しないでください。MethoCult™ H4435 Enrichedなどの標準的なMethoCult™培地中のすべてのヒトCFU培養物は、13〜15日目頃にカウントする必要があります。
培地中の栄養分がこの後に枯渇することが主な原因となり、細胞は培養物中に長くとどまることができません。同定したい原始前駆細胞を含め、すべての細胞は死に始めます。 さらに、15日より長く経過したCFU培養物のコロニーを解析することも、以下の理由から推奨いたしません。
●ミエロイドコロニーで一般的なように、コロニーが成長し続けることで過密、融合、および重複が生じ、正確に同定し数えることが困難になります。
●小さな赤血球コロニーで一般的なように、死んで崩壊し始めます。
ただし、推奨期間(13〜15日)内にCFU培養物をカウントできず、標準的なMethoCult™培地を使用している場合は、CFU培養トレイを33℃、5% CO2(湿度95%)のインキュベーターにさらに1〜2日間移してください。より低い温度は、細胞死を防止したり、増殖を阻害したりすることはありませんが、コロニーを正しくカウントできるようにコロニーの形態を維持するのに役立ちます。
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